1.主题内容与适用范围

1.1.主题内容

    本标准规定了测定水质急性毒性的测定发光细菌法 GB/T  15441-1995 的发光细菌法。

1.2.适用范围

    本标准适用于工业废水、纳污水体及实验室条件下可溶性化学物质的水质急性毒性监测。

2.方法提要

    基于发光细菌相对发光度与水样毒性组分总浓度呈显著负相关(P≤0.05),因而可通过生物发光光度计测定水样的相对发光度,以此表示其急性毒性水平。

    水质急性毒性水平按8所述条件选用相当的参比毒物*浓度(以mg/L为单位)来表征,或选用EC50值(半数有效浓度一一以样品液百分浓度为单位)来表征。

3.实验步骤

3.1.菌种复苏

   从冰箱2~5℃室取出含有0.2g发光细菌冻干粉西林瓶和氯化钠溶液,投入置有冰块的小号(1~1.5L)保温瓶,用lml移液器吸取0.5ml冷的氯化钠2%(g/100ml)(适用于5ml测试管) 或lml冷的氯化钠2.5%(g/100ml)(适用于2ml测试管) 注入已开口的冻干粉西林瓶,务必充分混匀。2min后菌即复苏发光(可在暗室内检验,肉眼应见微光),备用。

3.2.测定

3.2.1.室温

室温20~25℃。

同一批样品在测定过程中要求温度波动不越过±1℃。且所有测试器皿及试剂、溶液测前1h均置于控温的测试室内。

3.2.2.pH

若须测定包括pH影响在内的急性毒性,不应调节水样pH。

若须测定排除pH影响在内的急性毒性,须将水样和CK(氯化钠3g/100ml)pH测前调至下值:主要含Cu水样为4.5,主要含其他金属水样为5.4,主要含有机化合物水样为7.0。

3.2.3.溶解氧

本法只能测定包括溶解氧影响在内的急性毒性。

4.  测试结果表达

4.1.计算样品相对发光度(%0,并算出平均值。

                     *管或样品管发光量(mV)

相对发光度(%)=―――――――――――――― × 100%                       

                           CK管发光量(mV)

                          (平行1)%+(平行2)%+(平行3)%

相对发光度(%)平均值=――――――――――――――― × 100%               

                                        3

4.2.符合条件者,建立并检验*浓度(C)与其相对发光度(T)%均值的相关方程,也可以绘制关系曲线。

a.求出一元一次线性回归方程的a(截距)、b(斜率、回归系数)和r(相关系数),列出方程:T=a十bC*                                                              

查相关系数显著水平(P值)表,检验所求r值的显著水平。若P≤0.01,且EC50*=0.10±0.02mg/L,则所求相关方程成立;反之,不能成立,须重测系列*浓度的发光量。*溶液配制过夜者,须重配后再测定。

b.也可以据建立的上述方程绘制关系曲线。即指定发光度为10%和90%,代入上式,求出相应的二个*浓度,在常数坐标纸上,定出二点,画一直线,即为符合该方程的*浓度与相对发光度的关系曲线。

4.3.符合条件者,建立并检验样晶稀释浓度(C)与其相对发光度(T)%均值的相关方程,绘制关系曲线.

按4.2所述方法建立相关方程T=a+bC样,并检验相关系数r显著水平〈P值〉。若P≤0.05,则所求相关方程成立;反之,不能成立,须重测样品稀释系列浓度的发光量。